| Resumé |
La réplication de l'ADN est un mécanisme critique qui se déroule lors du cycle cellulaire. Sous contrôle d'un programme spatio-temporel, la réplication démarre aux niveaux des origines de réplication. L'identification de ces origines chez l'humain et la souris a mis en évidence des motifs G-quadruplexes (pG4). Des analyses génétiques ont montré leur rôle essentiel dans l'activité des origines de réplications. Cependant les G4s ne sont pas suffisant pour définir une origine de réplication, ils doivent être associés à d'autre éléments cis-régulateurs qui n'ont pas encore été identifiés. Afin de mettre en évidence de nouveaux éléments essentiels à l'activité origine, nous avons utilisé les origines modèles βA-globine et Med14. L'étude de ces origines a permis de mettre en avant la nécessité d'un second pG4, ainsi que la participation des boites CCAAT et TATA. Il est devenu alors possible d'obtenir une séquence minimale, de 90 pb, capable d'induire une initiation de la réplication très efficace. De plus, la boite TATA est essentielle au contrôle du moment de réplication. Cette origine constitue un outil moléculaire sans précédent qui permet l'étude mécanistique des origines de réplication chez les vertébrés. En effet, grâce à cette origine minimale, nous avons pu montrer que les deux pG4s présents dans la séquence devaient être situés sur le même brin afin d'aboutir à une activité origine. Une étude du positionnement des nucléosomes sur cette origine minimale a mis en évidence la présence d'une région dépourvue de nucléosomes au niveau des deux pG4s, séparée du site d'initiation par un nucléosome fortement positionné. Ces résultats sont en accord avec ceux déjà trouvés à l'échelle du génome, confirmant et validant notre analyse et notre origine minimale modèle. De plus, notre étude amène de nouveaux éléments quant à la définition des origines de réplications. |