Rôle du traffic intracellulaire dans la signalisation et la réponse lymphocytaire T
Role of the intracellular trafficking in T lymphocyte signaling and response
par Carpier Jean-Marie sous la direction de Hivroz Claire
Thèse de doctorat en Immunologie
École doctorale Bio Sorbonne Paris Cité

Soutenue le Wednesday 23 November 2016 à Sorbonne Paris Cité

Sujets
  • Cellules -- Interaction
  • Lymphocytes T

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Mots clés
LAT, Trafic intracellulaire, Rab6, VAMP7, IFT20, Activation lymphocytaire T
Resumé
Une réponse immunitaire efficace contre un large spectre de pathogènes ou contre des cellules tumorales nécessite l'activation des lymphocytes T CD4+. L'engagement du récepteur T par un peptide antigénique apprêté sur les produits de classe-II du complexe majeur d'histocompatibilité (peptide-CMH, pCMH) portés par une cellules présentatrices d'antigène (CPAg), conduit à de nombreux remaniements du lymphocyte T. Il s'établit notamment à l'interface entre le lymphocyte T et la CPAg, une structure spécialisée qui est la synapse immunologique (ou synapse immune). La synapse est le siège d'événements de signalisation intenses où diverses molécules de signalisation nécessaires l'amplification et la diversification du signal provenant du TCR sont recrutées. Ces évènements de signalisation sont régulés par l'adaptateur transmembranaire LAT (« Linker for Activation of T cells ») qui est présent à la membrane plasmique ainsi que dans des compartiments intracellulaires. La fraction intracellulaire de LAT est recrutée à la synapse immune et il est proposé que ces compartiments vésiculaires participent à la signalisation lymphocytaire T. L'objectif de ce travail de thèse a été de déterminer les voies de trafic intracellulaire nécessaires au recrutement de la fraction intracellulaire de LAT à la synapse immunologique et de comprendre le rôle de ce transport dans l'activation et la réponse lymphocytaire T. Par des approches d'extinction de l'expression de différentes molécules de transport intracellulaires dans les cellules T Jurkat ou des lymphocytes T CD4+ primaires humains ou par l'utilisation de souris Knock-Out (KO), nous avons mis en évidence plusieurs voies de transport impliquées dans le transport de LAT. Nous avons ainsi mis en évidence que le recrutement de LAT à la synapse immunologique nécessite une voie de sécrétion dépendante de la protéine SNARE vésiculaire VAMP7. L'analyse plus avant du transport de LAT a par ailleurs permis de montrer que LAT est présente dans des compartiments de recyclage alors que VAMP7 est principalement localisée dans l'appareil de Golgi. L'étude de la petite GTPase Rab6 et de la protéine t-SNARE syntaxine-16 qui sont impliquées dans des voies de transport rétrograde entre les endosomes de recyclage et l'appareil de Golgi, a permis de dévoiler que cette voie de transport est requise dans le recrutement de LAT à la synapse immunologique, ainsi qu'à la réponse lymphocytaire T in vitro, ex vivo et in vivo. Enfin, le rôle de la protéine de transport intraflagellaire IFT20, qui a déjà été mis en cause dans le transport du TCR, a été analysé chez la souris et a également montré des défauts de recrutement de LAT à la synapse et dans l'activation lymphocytaire T ex vivo et in vivo. Nos résultats mettent ainsi en évidence que la régulation du transport intracellulaire dans les lymphocytes T joue un rôle crucial dans l'activation lymphocytaire T. Nous proposons ainsi un modèle dans lequel LAT est constitutivement internalisé depuis la membrane plasmique et poursuit une voie de recyclage dépendante de l'appareil de Golgi qui contient la machinerie de sécrétion associé à VAMP7. Cette voie de transport intracellulaire, conditionnerait la resécrétion polarisée de LAT à la synapse immunologique dans les conditions d'activation et une réponse lymphocytaire T robuste.