VIH, MLO, LLPS, CPSF6, ANCHOR, Nuclear speckles, Transcription inverse

L'infection par le VIH-1 est responsable de l'une des principales pandémies de notre siècle. L'infection compromet progressivement le système immunitaire jusqu'à l'apparition d'un état connu sous le nom de syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA). Le virus peut persister à vie dans certaines cellules réservoirs grâce à sa capacité à s'intégrer dans le génome de l'hôte et à coexister silencieusement avec l'individu. L'interaction du VIH-1 avec les facteurs nucléaires de l'hôte est un déterminant essentiel du destin de la cellule infectée, notamment pour la cinétique de réplication et la sélection du site d'intégration. Le VIH-1 déclenche le regroupement du facteur nucléaire Cleavage and Polyadenylation Specific Factor 6 (CPSF6), mais le mécanisme sous-jacent est méconnu. Au cours de ma thèse, j'ai appliqué des méthodes d'imagerie révolutionnaires pour marquer l'ARN viral, l'ADN viral dérivé de la transcription inverse et les protéines de l'hôte afin de déchiffrer la régulation des étapes d'entrée post-nucléaire dans les macrophages. Nos données indiquent que le VIH utilise un phénomène biologique récemment découvert, appelé séparation de phase liquide-liquide (LLPS), pour détourner le noyau cellulaire. Nous observons que les amas de CPSF6 faisant partie des organelles sans membrane induites par le VIH (HIV-1 MLOs) suivent les règles de séparation de phase. Ceux-ci représentent des condensats biomoléculaires fonctionnels. Nous mettons en évidence que les HIV-1 MLO sont des centres de la transcription inverse nucléaire, tandis que l'ADN viral double brin, une fois formé, migre rapidement hors de ces structures. Les provirus qui transcrivent se localisent à l'extérieur, mais à proximité des HIV-1 MLO, dans des régions abondantes en LEDGF, connues pour être des sites de chromatine active. Ainsi, les HIV-1 MLO orchestrent les événements viraux avant l'étape d'intégration et créent un environnement favorable à la réplication virale. De plus, nous avons exploité notre technologie d'imagerie, HIV-1 ANCHOR, pour étudier la diffusion et la localisation des formes d'ADN virales episomales et intégrées dans le noyau de cellules mitotiques ou non. L'imagerie des complexes fonctionnels hôte-virus dans leur environnement nucléaire a permis de mieux comprendre les étapes d'entrée post-nucléaire du virus, révélant ainsi que les HIV-1 MLO constituent une nouvelle frontière de la recherche sur le VIH.