Les L,D-transpeptidases, cibles des carbapénèmes chez Mycobacterium tuberculosis
The L,D-transpeptidases, the targets of carbapenems in Mycobacterium tuberculosis
par Mathilde CORDILLOT sous la direction de Jean-Luc MAINARDI
Thèse de doctorat en Infectiologie
ED 157 Génétique, Cellulaire, Immunologie, Infectiologie et Développement

Soutenue le mercredi 20 novembre 2013 à Université Paris Descartes ( Paris 5 )

Sujets
  • Antituberculeux
  • Bêta-lactamines
  • Carbapénèmes
  • Tuberculose
Le texte intégral n’est pas librement disponible sur le web
Vous pouvez accéder au texte intégral de la thèse en vous authentifiant à l’aide des identifiants ENT d’Université Paris Cité, si vous en êtes membre, ou en demandant un accès extérieur, si vous pouvez justifier de de votre appartenance à un établissement français chargé d’une mission d’enseignement supérieur ou de recherche

Se connecter ou demander un accès au texte intégral

Les thèses de doctorat soutenues à Université Paris Cité sont déposées au format électronique

Consultation de la thèse sur d’autres sites :

Theses.fr

Description en anglais
Description en français
Mots clés
Mycobacterium tuberculosis, Peptidoglycane, L,D-transpeptidases, Β-lactamines, Carbapénèmes
Resumé
Mycobacterium tuberculosis est responsable de 8,7 millions de nouveaux cas de tuberculose et de 1,4 millions de décès en 2011. L'émergence de souches résistantes aux deux antituberculeux majeurs, isoniazide et rifampicine, (MDR) et aux antibiotiques de seconde ligne (XDR), ainsi que la difficulté d'éradiquer les formes « dormantes » du bacille nécessitent la recherche de nouveaux antibiotiques. Les β-lactamines n'ont jamais été utilisées en thérapeutique car M. tuberculosis produit une β-lactamase à large spectre, BlaC. Cependant, l'association d'une β-lactamine appartenant à la classe des carbapénèmes, le méropénème, et d'un inhibiteur de β-lactamase, l'acide clavulanique, est active sur M. tuberculosis incluant des souches XDR. Notre objectif a été de caractériser les cibles des carbapénèmes qui sont atypiques chez M. tuberculosis, parce que le peptidoglycane de cette bactérie contient majoritairement (80%) des ponts interpeptidiques formés par une classe particulière de transpeptidases, les L,D-transpeptidases. Nous avons comparé les cinq L,D-transpeptidases de M. tuberculosis au niveau de leur activité in vitro dans la formation des ponts interpeptidiques du peptidoglycane et dans la réaction d'inactivation par les carbapénèmes. Nous avons ainsi pu montrer que les cinq L,D-transpeptidases sont fonctionnelles in vitro. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt4 et LdtMt5 sont capables de former des ponts interpeptidiques du peptidoglycane reliant l'acide aminé en position 3 d'un substrat tétrapeptidique donneur à l'acide aminé en position 3 d'un substrat tétrapeptidique accepteur. Ces mêmes enzymes peuvent également utiliser la D-méthionine comme accepteur dans une réaction d'échange de la D-Ala4 du substrat tétrapeptidique. LdtMt1, LdtMt2, LdtMt3 et LdtMt4 forment un complexe covalent avec les carbapénèmes. La réaction d'inactivation des L,D-transpeptidases par les carbapénèmes se déroulent en deux étapes. Dans un premier temps, un intermédiaire covalent réversible est formé (constante catalytique k1) puis la deuxième étape aboutit à la formation de l'acylenzyme (constante catalytique k2). La détermination des constantes catalytiques d'inactivation k1 et k2 a révélé d'importantes différences entre les carbapénèmes. Excepté pour LdtMt1, l'imipénème inactive plus rapidement les L,D-transpeptidases que les autres carbapénèmes suggérant que des modifications de la chaine latérale pourraient être envisagées pour optimiser l'activité « anti-mycobactérienne » de cette classe de β-lactamines. Nous avons en parallèle initié l'étude de la régulation des L,D-transpeptidases dans différentes conditions de culture ce qui permettra à terme d'identifier les L,D-transpeptidases essentielles pour la croissance et la persistance de M. tuberculosis. Ce travail pourrait déboucher sur l'identification de cibles essentielles permettant l'éradication des formes dormantes de M. tuberculosis qui sont très difficile à traiter.