Immunothérapie, Délivrance de gènes, Ultrasons focalisés de haute intensité, Il-12, Liposomes cationiques magnétiques

L'immunothérapie anticancéreuse est une stratégie thérapeutique prometteuse partie prenante de nombreux protocoles de traitement du cancer. L'IL-12 est une cytokine thérapeutique impliquée dans l'induction de réponses immunitaires à la fois innées et adaptatives. Cependant, l'application clinique de l'IL-12 a été entravée par une toxicité sévère. Cette toxicité pourrait être atténuée lors de l'expression d'IL-12 localement avec un vecteur de délivrance de gène tel que des liposomes cationiques. De plus, de nombreux essais précliniques ont montré les effets antitumoraux remarquables des techniques d'ablation tumorale associées à l'immunothérapie. Sur la base de ces connaissances, nous avons proposé un projet pour étudier l'effet d'immunomodulation, une combinaison entre la transfection du gène IL-12, un lipide cationique jouant le rôle d'adjuvant et l'ablation par ultrasons focalisés chez des souris porteuses de tumeurs. Par ailleurs, afin d'augmenter la quantité de plasmide intratumoral, un ciblage magnétique avec des liposomes cationiques magnétiques (MCL) a été envisagé. Dans la première partie, des MCLs de moins de 200 nm, positivement chargés, ont été préparés avec succès par 2 méthodes, la sonication cosolvant (cosol) et l'évaporation en phase inverse (REV). Ces deux formulations MCL ont montré des relaxivités IRM r2 élevées à 7T et une efficacité de lipoplexation élevée. En outre, les cosol_MCL se sont révélés supérieurs aux REV_MCL, en particulier en termes d'efficacité de transfection. De plus, en présence d'un champ magnétique externe, l'internalisation et la transfection avec des complexes cosol_MCLs / ADNp ont été améliorées. Les cosol_MCL et leurs lipoplexes pourraient être appropriés pour être appliqués dans la délivrance systémique de gènes car ils se sont avérés ne pas être cytotoxiques pour les hépatocytes même à haute concentration. Bien que l'efficacité de ciblage sur le site de la tumeur avec un aimant, n'ait pas été très important ciblés, ces MCLs sont des agents de contraste T1 permettant d'améliorer le contraste IRM in vivo et de suivre ces agents chez la souris. Dans la deuxième partie de mon projet, diverses conditions d'échographie focalisée à haute intensité (HIFU) ont été testées in vitro pour leurs effets sur les cellules cancéreuses CT26. Nous avons constaté que la valeur seuil de la dose thermique, CEM43 ° C, pour la mort cellulaire était d'environ 10^3 minutes. De plus, un CEM43 ° C de 10 à 10^5 minutes a provoqué la libération et l'expression maximales de hsp70 dans les cellules CT26 traitées par HIFU. L'étude in vivo réalisée a permis de montrer que l'application de HIFU 80T 60s permet non seulement d'induire l'ablation de la tumeur mais aussi d'activer les cellules T cytotoxiques pour la production de TNF-a. De plus, en raison de la transfection inefficace des lipoplexes même après injection i.v ou locale, l'injection d'ADNp nu dans la tumeur a été choisie. Le pFAR4.2-mIL12 nu a été transféré avec succès et a montré certains avantages dans l'activation des cellules T. De même, le lipide cationique YUK 1350 s'est avéré stimuler l'activation des cellules T. La combinaison de ces 3 traitements a également montré un effet d'immunomodulation amélioré. En conclusion, au cours de cette thèse, une formulation de MCL a été préparée et optimisée avec succès pour la transfection in vitro. En outre, l'effet de HIFU sur les cellules CT26 a également été évaluée in vitro. Les premiers résultats de la transfection pFAR4.2-mIL12, de l'ablation HIFU, de l'injection de lipides cationiques et de leur combinaison sur la réponse immunitaire ont pu être réalisés. D'autres études devraient être menées pour optimiser la transfection avec des liposomes cationiques, la technique d'ablation HIFU et leur association pour l'immunothérapie.