La SUMOylation du kinétochore et ses effets sur la ségrégation chromosomique
The SUMOylation of the kinetochore and its effects on the chromosome segregation
par Joseph BAREILLE sous la direction de Nicolas LEULLIOT
Thèse de doctorat en Biochimie
ED 563 Médicament, Toxicologie, Chimie, Imageries

Soutenue le lundi 28 novembre 2016 à Sorbonne Paris Cité

Sujets
  • Centromère
  • Chromosomes
  • Kinétochores
  • Lysine
  • Microtubules
  • Mitose
  • Sumoylation

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Mots clés
SUMO, Mitose, Kinétochore, Centromère
Resumé
Certaines protéines du kinétochore, l'interface protéique entre les microtubules et les centromères, ont été identifiées comme étant régulées par SUMO, une protéine de type ubiquitine. Dans des lignées cellulaires humaines, la déplétion de SENP6, une isopeptidase clivant les chaînes poly-SUMO, entraîne la dégradation protéasomale de CENP-I au moyen de ligases-ubiquitine dépendantes de SUMO. Cependant, les mécanismes liant la régulation du kinétochore et la SUMOylation restent largement méconnus. Mon travail doctoral est orienté vers l'utilisation d'essais biochimiques afin d'identifier les lysines impliquées dans la SUMOylation de CENP-I et de reconstituer des kinétochores in vitro et 3) d'étudier l'impact de la SUMOylation sur cette structure. Les produits de la SUMOylation in vitro de CENP-I ont été analysés par spectrométrie de masse afin d'identifier les lysines associées. J'ai aussi reconstitué des kinétochores in vitro en suivant un protocole publié. Cependant, ces kinétochores sont trop instables pour être utilisés dans des essais biochimiques. Pour pallier ces limitations, j'ai adapté une autre approche en fusionnant CENP-T au système LacI. Si ce système m'a permis de recruter certaines des protéines du kinétochore, il génère des contraintes nécessitant de plus amples optimisations pour être utilisé lors d'études biochimiques.