Haemophilus influenzae, Transporteurs TonB-dependant, Hème, Hémoglobine, Hémoglobine-haptoglobine

Haemophilus influenzae est une bactérie à Gram négatif qui peut causer diverses infections, notamment la méningite, l'otite moyenne ou la pneumonie. Il s'agit d'un pathogène humain obligatoire qui dépend de l'acquisition d'hème de l'hôte pour survivre. Il a été démontré précédemment que H. influenzae peut acquérir de l'hème à partir de l'hémoglobine humaine (Hb) ou du complexe hémoglobine-haptoglobine (Hb-Hp) par l'intermédiaire de protéines de liaison à l'hémoglobine et à l'hémoglobine-haptoglobine (Hgps), appartenant à la famille des transporteurs TonB-dépendants. Cependant, les détails moléculaires de l'interaction entre les Hgps et l'Hb ou l'Hb-Hp, ainsi que les mécanismes précis d'extraction et de transfert de l'hème, n'ont pas encore été élucidés. En exprimant les Hgps dans une souche d'E. coli auxotrophe pour l'hème, nous avons confirmé que les quatre Hgps produites par H. influenzae Rd KW20 peuvent médier l'acquisition de l'hème à partir de l'Hb humaine ou du complexe Hb-Hp. Cependant, ces quatre protéines sont fonctionnellement distinctes lorsque d'autres sources d'hème sont utilisées. Les résultats obtenus in vivo suggèrent également que les Hgps extraient l'hème préférentiellement de la chaîne bêta de l'Hb. Afin d'étudier plus en avant le mécanisme par lequel les Hgps lient, extraient et transportent l'hème, nous avons optimisé les conditions d'expression et de purification de l'une des Hgps. Malheureusement, le faible rendement de production s'avère limitant pour de nombreuses applications. Néanmoins, nous avons constaté que la protéine purifiée est un mélange de monomères et de dimères. Nous avons également pu utiliser cette protéine pour réaliser des tests de pull-down qui ont confirmé l'interaction de Hgp avec Hb et Hb-Hp, mais ont indiqué qu'elle ne peut pas se lier à l'haptoglobine seule ou à la myoglobine.