EV-TRAP, CD63-PHluorin, CD9-PHluorin, PSMA, Extracellular Vesicles, Prostate Cancer, Zebrafish, Live-Imaging

Les vésicules extracellulaires (VEs) représentent aujourd'hui un sujet d'actualité dans différents domaines de la biologie, y compris la biologie cellulaire et moléculaire des tumeurs. Plusieurs études suggèrent que les VEs libérés par les cellules tumorales sont des moyens de communication intercellulaire entre les cellules, séparées par des distances courtes ou longues, dans un organisme multicellulaire. Les VEs dérivés de tumeurs et leurs cargo jouent un rôle central dans la formation de niches pré-métastatiques, dans la migration et la survie des tumeurs, dans le maintien, la prolifération et l'angiogenèse des tumeurs primaires et des métastases, ainsi que dans l'immunoévasion et l'acquisition de la résistance aux médicaments. Dans ce travail, nous avons décidé de nous concentrer sur la dynamique et la biologie in vivo des VEs dérivés du cancer de la prostate, car très peu de choses sont connues dans ce domaine. Plusieurs approches ont été récemment développées pour suivre en direct les VEs endogènes ou exogènes (injectés) tumoraux à l'échelle d'une seule particule, et dans un organisme à coeur battant, transparent et vertébré comme l'embryon de poisson zèbre. Cependant, les outils pour guider et manipuler de manière sélective la dissémination et le ciblage des VEs tumoraux in vivo font encore défaut dans le domaine, ce qui complique les efforts pour décoder de manière mécaniste la façon dont les VEs contribuent réellement au développement de la pathologie. Nous avons réfléchi à la manière dont une manipulation topographique de la distribution des VEs tumorales in vivo pourrait aboutir à une meilleure compréhension de leurs rôles biologiques, par exemple dans la formation de niches pré-métastatiques. De plus, forcer le réacheminement spatial des VEs tumoraux vers une cible anatomique choisie in vivo pourrait empêcher ou réduire, selon le moment et le site d'action, la propagation des VEs tumoraux (et la propagation des métastases) dans les organes vitaux. Nous décrivons ici une nouvelle approche in vivo et basée sur les cellules pour capturer sélectivement et accumuler localement les VEs tumoraux circulants vers des organoïdes de piégeage implantés ou des tissus de piégeage endogènes de choix. Nous avons combiné le marquage génétique avec pHluorin des VEs tumoraux, bénéficiant des travaux développés dans notre laboratoire au cours des dernières années, avec la possibilité d'exprimer un nanobodies anti VEs-tag (pHluorin, ou un tag naturel comme le PSMA) exposé au niveau de la surface de certaines cellules d'intérêt, vers lesquelles nous avons voulu rediriger et accumuler des VE tumorales PCa. Nous démontrons comment la présence simultanée des VEs enrichis en CD63 ou CD9-pHluorin ou PSMA dérivés de PCa dans un système présentant des surfaces cellulaires accessibles GFP-TRAP ou PSMA-TRAP, permet une accumulation et un réacheminement importants des VEs-pHluorin et -PSMA dérivés de PCa vers le Sites EV-TRAP, à la fois in vitro et in vivo dans l'embryon de poisson zèbre.