Lymphome cérébral primitif, Immunothérapie, Épigénétique, IL-10, CAR-T cells

Le lymphome cérébral primitif (LCP) est un sous-type rare de lymphome diffus à grandes cellules B (LDGCB). La rechute/progression du LCP est associée à un pronostic extrêmement défavorable, avec une survie globale médiane de 6,8 mois à partir de la rechute. Les chimeric antigen receptor (CAR)-T cells anti-CD19 ont démontré une efficacité remarquable pour le traitement du LDGCB systémique. Les patients présentant un LCP ont été exclus de la plupart des essais pivots par crainte d'une majoration de la neurotoxicité. Nous avons été les premiers à rapporter les résultats de CAR-T anti-CD19 commerciaux chez 9 patients présentant un LCP en rechute/réfractaire, lourdement prétraités, dans le cadre de l'expérience du réseau d'expert national français des lymphomes oculo-cérébraux, entre mai 2020 et mars 2021. Nous avons observé une réponse partielle et complète chez 1/9 et 5/9 patients respectivement, sans toxicité inattendue. Ces résultats soutiennent le développement des CAR-T cells anti-CD19 dans le LCP. Néanmoins, avec une survie sans progression médiane de 122 jours, notre étude a mis en évidence la nécessité d'améliorer les CAR-T pour augmenter leur efficacité à long terme. Nous avons cherché à optimiser les CAR-T cells pour renverser l'immunosuppression du LCP en ciblant deux voies différentes, à savoir SUV39H1, une histone méthyltransférase qui inhibe les gènes associés aux phénotypes souche/mémoire, et l'axe cible/récepteur étudié. Tout d'abord, nous avons caractérisé la lignée de LCP TK (immunohistochimie, cytométrie en flux, séquençage nouvelle génération et sécrétion du biomarqueur par ELISA) et confirmé qu'elle reproduit de nombreuses caractéristiques de la maladie humaine. Ensuite, nous avons évalué la cytotoxicité in vitro à travers une analyse en 2D utilisant la luciférase et un modèle sphéroïde en 3D, tous deux avec des cellules TK incubées en présence de CAR-T cells anti-CD19 de deuxième génération contenant un domaine de costimulation 4-1BB. Les CAR-T, au contraire des cellules T non transduites, tuent les cellules tumorales dans ces modèles in vitro, avec un effet dose-dépendant. Enfin, nous avons développé avec succès un modèle de xénogreffe orthotopique de LCP via l'injection stéréotaxique des cellules TK et TK-Luciférase+ dans le striatum de souris NSG. Les CAR-T anti-CD19 sont détectés dans le cerveau par cytométrie en flux et histologie et augmentent considérablement la survie des souris de manière dose-dépendante. Nous évaluons actuellement le potentiel de reprogrammation épigénétique des CAR-T cells en invalidant SUV39H1 pour augmenter leur expansion et persistance. Nos premiers résultats suggèrent que la délétion de SUV39H1 dans les CAR-T cells anti-CD19 améliore le contrôle antitumoral à long terme dans le LCP. Pour notre deuxième stratégie consistant à cibler la voie cible/récepteur étudiée, nous avons évalué les effets de la cible sur les cellules TK et les fonctions des CAR-T cells. Dans le modèle sphéroïde, les cellules TK ont été exposées à différentes doses de CAR-T cells anti-CD19 et de la cible recombinante ou d'anticorps dirigés contre cette cible. Nous avons observé une augmentation de la prolifération des TK après ajout de la cible recombinante, alors que les anticorps dirigés contre cette cible n'ont presque aucun effet sur la croissance de ces cellules. Cependant, nous avons montré que la présence d'anticorps contre la cible augmente la cytotoxicité des CAR-T cells in vitro. Enfin, nous avons réussi à produire des CAR-T anti-CD19 déficients en récepteur de la cible étudiée, dont les effets seront évalués à l'aide de nos modèles in vitro et in vivo. Pour éviter l'induction potentielle d'un épuisement prématuré du fait de l'absence d'immunosuppression médiée par cette cible, nous discutons de la possibilité d'utiliser des CAR-T cells double knock-out en récepteur de la cible étudiée et SUV39H1 afin d'améliorer la protection antitumorale à long terme dans le LCP.