| Resumé |
Contexte : Les mastocytes (MC) sont des cellules granuleuses provenant de la lignée hématopoïétique localisées dans la plupart des tissus. Ce sont des cellules effectrices des réponses allergiques lors de stimulation via le récepteur de haute affinité aux IgE (FceRI) induisant la dégranulation des granules de sécrétion (GS). Bien que le trafic des GS jusqu'à leur site de sécrétion soit indispensable dans la dégranulation mastocytaire, il n'en demeure pas moins que la machinerie moléculaire régulant le transport de ces vésicules n'a pas encore été totalement caractérisée. Objectifs : Afin d'identifier de nouveaux effecteurs régulant la dégranulation mastocytaire, la caractérisation du protéome des MC dérivés des progéniteurs de moelle osseuse (BMMC) par spectrométrie de masse a permis l'identification de 3876 protéines. Une analyse in silico centrée sur l'identification d'effecteurs spécifiquement exprimées dans les MC dont leur fonction dans la dégranulation mastocytaire n'est pas connue a permis d'identifier la large RabGPTase Rab44. Rab44 est une RabGTPase atypique appartenant à la famille des larges Rab. Le domaine Rab carboxy-terminal de Rab44 est associé à un domaine EF-Hand, un domaine boucle-bouclé et un domaine riche en proline. Résultats : Afin de mieux comprendre le rôle de Rab44, nous avons généré un modèle murin invalidé pour l'allèle Rab44 (KORab44) par l'approche CRISPR/Cas9. Nous avons montré que les BMMC des souris KORab44 présente un important défaut de dégranulation FceRI-médiée due à un défaut de translocation des GS jusqu'à leur site de sécrétion. In vivo, les souris KORab44 présentent une plus faible sensibilité à l'anaphylaxie passive cutanée médiée par les IgE. En revanche, la sécrétion de cytokines, les voies de signalisation proximales en aval du FceRI et la réorganisation du réseau de microtubules ne sont pas altérées en absence de Rab44 suite à l'activation. Nous avons également montré que le domaine Rab de Rab44 est nécessaire à son recrutement à la membrane des GS. De plus, la surexpression du domaine Rab seul induit un défaut de dégranulation associé à un défaut de translocation des GS. Cet effet dominant négatif de la surexpression du domaine Rab est dépendant de son ancrage lipidique, également nécessaire à l'activité de la protéine entière. Conclusion & Perspectives : Rab44 est un effecteur nouvellement décrit de la dégranulation mastocytaire dont le mécanisme de régulation de la translocation des GS reste encore à être élucidé. Afin de comprendre si la translocation des GS qui implique Rab44 est dépendant de la kinésine-1, un modèle murin double KO pour Rab44 et Kif5b est généré en parallèle d'une approche biochimique pour déterminer les interactants de Rab44. Nos travaux tendent à montrer que Rab44 serait une cible thérapeutique d'intérêt afin de traiter les réactions allergiques en inhibant spécifiquement la dégranulation mastocytaire. |