| Resumé |
Le virus de l'hépatite C (VHC) circule dans le sang des patients sous plusieurs formes. Les particules virales les moins denses, qui sont aussi les plus infectieuses, sont enrichies en triglycérides et en esters de cholestérol, et contiennent les apolipoprotéines (Apos) B, CI, CII, CIII et E. La composition de ces complexes virus-lipides rappelle celle des lipoprotéines de très basse densité (VLDLs), et leur vaut leur appellation de « lipo-viro-particules ». Leur morphogenèse pourrait se dérouler à l'intérieur et/ou à l'extérieur de l'hépatocyte humain, qui est le théâtre à la fois du cycle infectieux du VHC et de la biogenèse des VLDLs. Dans le modèle de culture classique du VHC en lignée Huh-7, dérivée d'hépatocarcinome, le rôle de la voie de biogenèse des VLDLs dans la morphogenèse du VHC fait l'objet de controverses. L'objectif de ce travail de thèse était primitivement de réévaluer cette question dans un modèle plus pertinent pour l'étude des relations entre le virus et son hôte : les hépatocytes humains adultes en culture primaire (HHPs). Contrairement aux cellules de la lignée Huh-7, les HHPs synthétisent d'authentiques VLDLs et produisent des particules de VHC comparables à celles des particules virales retrouvées in vivo en termes de densité et d'infectiosité. Dans le modèle des HHPs, nous avons montré que l'inhibition pharmacologique de la protéine microsomale de transfert des triglycérides (MTP), une enzyme clé indispensable à la biogenèse des VLDLs, entrainait une diminution à la fois de la production de particules de VHC et de leur infectiosité, mais ce, de manière non parallèle à la diminution de sécrétion des VLDLs. De plus, l'extinction spécifique de l'ApoB, l'Apo non-échangeable qui constitue l'échafaud même des VLDLs, n'entrainait aucun impact sur le cycle infectieux du VHC. Nous nous sommes également intéressés au rôle de l'ApoE, une Apo échangeable considérée comme un facteur crucial pour la production de particules de VHC sur la base d'études réalisées en lignées cellulaires. Or de façon surprenante, l'extinction spécifique de son expression en HHPs n'avait aucun impact sur le cycle infectieux du VHC. Nous avons alors émis l'hypothèse que d'autres Apos échangeables synthétisées par les hépatocytes - les Apos AI, AII, CI, CII et CIII - pourraient être impliquées dans la morphogenèse du VHC ; en effet, dans des études en lignées cellulaires, ces Apos semblent pouvoir tenir le rôle de l'ApoE dans le cycle du VHC, et ce de manière apparemment redondante. En HHPs, nous avons observé une diminution de la production de particules virales, qu'elles soient infectieuses ou non, lors de l'extinction spécifique de l'ApoAII, un composant des lipoprotéines de haute densité ou HDLs mais pas des VLDLs. L'extinction spécifique de l'ApoCI ou de l'ApoAI - mais sous condition, pour cette dernière, que le niveau basal d'ApoCI soit faible dans les HHPs - n'affectait pas la production totale de particules virales mais entrainait une diminution de leur infectiosité. L'ensemble de ces résultats illustre l'importance du modèle choisi pour étudier les interactions du virus avec le métabolisme de son hôte, et révèle un jeu d'interactions complexes entre le VHC et les lipoprotéines hépatiques dans le modèle physiologiquement pertinent des HHPs. L'activité de la MTP est nécessaire à la production hépatocytaire de particules de VHC et à l'acquisition de leur pouvoir infectieux, mais pas via son rôle de lipidation de l'ApoB dans la biogenèse des VLDLs. De plus, le VHC usurpe différentes Apos hépatiques qui jouent un rôle non redondant dans au moins deux étapes distinctes de la morphogenèse de particules virales infectieuses : l'ApoAII serait impliquée dans une étape nécessairement intracellulaire de formation des particules virales, tandis que l'ApoCI ou, de manière contingente, l'ApoAI interviendraient plus tardivement dans une étape de maturation où les particules virales gagnent en infectiosité. |