Phtalates, PPARgamma, Placenta, Différenciation trophoblastiques, Lipidomiques, Perturbateurs endocriniens, Lipodystrophie partielle familiale de type 3 (FPLD3), HCG

CONTEXTE : les récepteurs activés par les proliférateurs des peroxysomes (PPAR) sont des membres de la superfamille des récepteurs nucléaires qui agissent en tant que facteurs de transcription activés par des ligands. Le PPARgamma joue un rôle essentiel dans la différenciation des adipocytes, le métabolisme des lipides et le développement du placenta. Les phtalates sont des contaminants environnementaux couramment utilisés comme plastifiants dans les produits à base de polychlorure de vinyle (PVC). Récemment, l'exposition de la femme enceinte aux phtalates, qui sont des ligands potentiels de PPARgamma, a été associée à de la prématurité, à des petit poids de naissance et à des interruptions de grossesse. Par ailleurs, des données récentes suggèrent que certaines mutations rares du domaine de liaison du ligand de PPARgamma (LBD) responsables de la lipodystrophie (FPLD3) seraient associées à des complications de la grossesse. OBJECTIFS : notre objectif général était d'évaluer l'activité et le rôle du PPARgamma placentaire durant la grossesse, et en particulier l'impact des phtalates et d'une mutation de PPARgamma associée à FPLD3 (E352Q) dans la différenciation et la fonction des trophoblastes humains in vitro. METHODES : dans ce but, nous avons : 1 / construit des plasmides rapporteurs (PPRE-H2B-eGFP et PPRE-pNL1.3 [secNluc]) pour quantifier l'activité de PPARgamma in vitro ; 2 / étudié l'action du MEHP (mono-2-éthylhexyl-phtalate) sur l'activité de PPARgamma et la différenciation des cytotrophoblastes villeux humains (CTVs) en utilisant des techniques d'immunofluorescence, de mesure de l'activité de PPARgamma, de dosage d'hCG, de western blot et d'analyse lipidomique ; 3 / étudié l'impact de la mutation de PPARgamma (E352Q) sur l'activité de PPARgamma en utilisant un lignée cellulaire NIH/3T3sur la différenciation in vitro des CTVs par analyse fonctionnelle après inactivation avec un siRNA et restitution de l'activité de PPARgamma « wild type » et de PPARgamma muté. RÉSULTATS : les constructions plasmidiques rapporteurs ont permis de quantifier l'activité de PPARgamma dans différents types cellulaires et conditions expérimentales. De plus, nous avons montré que des doses non toxiques de 0,1 µM et 1 µM de MEHP inhibaient significativement l'activité de PPARgamma et la différenciation des CTVs par rapport aux témoins, alors qu'étonnamment, 10 µM avait l'effet opposé. Par ailleurs, l'exposition de CTVs au MEHP inhibe la production d'hCG, altère de manière significative la composition lipidique trophoblastique perturbe sur la voie des MAPK (seul 10 µM de MEHP augmente la pERK alors que 0,1 ,1 et 10 µM diminuent les niveaux de protéine pJNK). Enfin, la mutation E352Q - associée à une grossesse pathologique a non seulement diminué l'activité de PPARgamma, mais également altéré la formation in vitro de syncytiotrophoblastes par fusion des CTVs primaires. CONCLUSION : des études de KO réalisées sur des souris ont montré l'importance de PPARgamma pour le développement du placenta et l'issue de la gestation. En utilisant deux nouveaux systèmes rapporteurs combinés avec un modèle in vitro de différenciation de CTVs, nous avons montré que le MEHP et la mutation E352Q perturbent l'activité de PPARgamma et la physiologie du trophoblaste humain ce qui pourraient expliquer les complications de la grossesse observées in vivo.