Exposition aux HAP, Grossesse, Sérum maternel, Sérum de sang de cordon ombilical, SPE, HPLC-UV-FD, GC/MS, Validation, Profils d'exactitude, Cultures cellulaires de trophoblastes humains, Cotylédon humain perfusé

Les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques (HAP) sont principalement émis par les activités humaines et représentent l'un des principaux groupes de polluants dans l'air, les sols, les eaux et les aliments. Par conséquent, ils font l'objet d'une surveillance atmosphérique, et alimentaire. Cette étude s'attache au cas particulier de la femme enceinte et son fœtus. En effet, l'exposition pendant la grossesse est à l'origine de malformations fœtales, de prématurité et de troubles pouvant survenir ensuite chez l'enfant mais aussi chez l'adulte. À ce jour, seuls quelques HAP réglementés par l'environnement ont été recherchés et quantifiés dans le sang maternel ou le sang de cordon ombilical. De plus, les données sur les performances analytiques sont souvent manquantes. Ainsi ce projet vise pour la première fois en France à développer et valider des méthodes analytiques et biologiques pour la surveillance de l'exposition aux HAP durant la grossesse. Dans une première partie, la quantification simultanée des 24 HAP réglementés dans les sérums de sang maternel et de sang de cordon ombilical a été développée. Tout d'abord, l'analyse des 24 HAP par chromatographie en phase liquide et par détections UV et fluorescence (HPLC-UV-FD) et par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) a été optimisée. Le prétraitement des échantillons de sérum a ensuite été développé. La précipitation des protéines présentes dans le sérum a été optimisée avec un plan d'expérience afin d'interrompre toutes les interactions entre les protéines et les HAP. Un protocole d'extraction sur phase solide (SPE), avec un supportt à base de silice greffée C18, a ensuite été optimisé pour extraire et concentrer les HAP. Pour améliorer les facteurs d'enrichissement, les fractions d'élution de SPE ont ensuite été évaporées et 2 approches ont été évaluées: une évaporation totale ou partielle (méthode "dernière goutte"). Le protocole analytique final impliquant la préparation d'échantillon suivi par l'analyse en HPLC-UV-FD ou GC-MS a été validé avec succès à partir d'un mélange de sérums maternels dopés et un mélange de sérums dopés provenant de sangs de cordons ombilicaux avec l'approche des profils d'exactitude. Ensuite, des échantillons de sérum provenant de sang maternel et de sang de cordon ombilical ont été analysés par HPLC-UV-FD et GC-MS. Enfin, les méthodes analytiques développées précédemment ont été utilisées pour l'étude du transfert placentaire des HAP avec le modèle de perfusion du cotylédons humains ex vivo. Les perfusions ont été réalisées pour la première fois avec un mélange de 14 HAP (concentration totale : 1 microM) et leur transfert placentaire a été démontré. De plus, des cultures cellulaires de trophoblastes humains exposées avec ce mélange de 14 HAP (concentration totale : 1 microM) ont été réalisées pour évaluer l'impact de l'exposition aux HAP sur les fonctions placentaires. Le dysfonctionnement de certaines fonctions placentaires telles que la fusion et la différentiation des trophoblastes, les fonctions endocrines et les fonctions de détoxifications.