Ung2, Vpr, Vih, Rmn, Interaction, Uracile, Glycosilases, Ber

Durant sa multiplication, le VIH-1 a besoin de protéines régulatrices dont dépendent différentes étapes de son cycle de réplication. L'intégration de l'ADN viral dans le génome de la cellule hôte, l'activation de la transcription du LTR (long terminal repeat) et l'arrêt du cycle cellulaire en phase G2 de la cellule sont des étapes indispensables à la multiplication virale sous le contrôle de la protéine de régulation virale Vpr. La protection de l'intégrité du génome viral est contrôlée par l'Uracile DNA glycosylase (UNG2), protéine cellulaire. D'une part, cette protéine humaine répare les mutations induites qui permettent au virus d'échapper au système de défense immunitaire, c'est donc un facteur de restriction de la réplication du VIH. Mais d'autre part, le virus l'emporte avec lui et l'utilise aux premiers stades de son cycle réplicatifs. Ce rôle multiple d'UNG2 rend son interaction avec la protéine Vpr du VIH, qui n'a pas d'équivalent chez l'homme, une cible potentielle contre le VIH. Il a été démontré que le motif WXXF dans l'hélice proche du domaine C-terminal de l'UNG2 et le tryptophane 54 de l'hélice 3 de Vpr sont essentiels à l'interaction. Des résultats de cristallographie ont démontré que Vpr interagissait avec UNG2 à l'aide d'une poche formée entre ces hélices 1 et 2 de celle-ci, au niveau du siège de l'interaction d'UNG2 avec l'ADN et au niveau d'une Leucine 272 d'UNG2. Dans ce travail, nous avons mis au point un protocole d'expression et de purification de l'Uracile DNA Glycosilase-2 humaine (hUNG2). Nous avons également optimisé un protocole d'expression de la protéine virale Vpr en présence de DPC. Nous avons mené l'étude structurale de l'interaction entre Vpr et UNG2 en commençant par le fragment UNG (218-238), contenant le motif WXXF, en interaction avec le domaine C-terminal de Vpr (52-96) contenant le tryptophane 54. L'interaction a été démontrée in vitro. L'attribution des résonances 13C et 15N du squelette de la protéine humaine UNG2 a été réalisée. L'interaction de l'UNG2 avec la protéine Vpr a ensuite été entreprise afin d'identifier les acides aminés à l'interface par perturbation des déplacements chimiques de l'UNG2. Un premier modèle comportant les acides aminés concernés dont les résonances nucléaires sont perturbés par l'interaction, comprenant la leucine 272, a été fait dans l'acétate en présence de DPC. Une fois le complexe reconstruit, il sera intéressant d'effectuer des tests structuraux et fonctionnels d'inhibition de l'interaction entre ces deux protéines. Des molécules ont été isolées contre Vpr par criblage sur puces à petites molécules et les plus efficaces et plus affines seront optimisées afin de concevoir de nouveaux perturbateurs de la réplication virale.