ABC, Transporteurs, Barrière hématoencephalique, Chromatographie liquide, BCRP, Spectrométrie de masse, LC-MS/MS, Protéomique, AQUA, QTAP

Les transporteurs ABC (ATP-binding cassette) localisés à la barrière hématoencéphalique (BHE) protègent le cerveau de xénobiotiques toxiques, mais ils peuvent aussi empêcher l'entrée de molécules d'intérêt thérapeutique. L'objectif principal de ces travaux était de développer et de valider une méthode de quantification ciblée par LC-MS/MS pour la quantification absolue de transporteurs ABC. Cette méthode a ensuite été appliquée à l'analyse d'échantillons d'intérêt pharmacologique. La mise au point de la méthode s'est focalisée dans un premier temps sur le développement d'une protéine membranaire permettant le contrôle des différentes étapes du traitement d'échantillon puisque le rendement de récupération de cette protéine est similaire à celui des transporteurs ABC. Dans un second temps, l'analyse des micro-vaisseaux cérébraux a mis en évidence l'intérêt de normaliser les résultats en utilisant un marqueur des cellules endothéliales pour la quantification des transporteurs ABC afin de tenir compte de l'enrichissement plus ou moins important en cellules endothéliales des échantillons. La méthode a été ensuite appliquée à la validation d'un modèle de souris humanisée ainsi qu'à l'étude de l'expression différentielle de P-gp, BCRP et MRP1 à 5 dans des micro-vaisseaux d'échantillons de gliome humain, des cellules endothéliales mises en culture et la lignée cellulaire humaine hCMEC/D3.